监测细胞免疫对于基因治疗产品及疫苗产品的安全性和有效性具有重要的不可替代的作用。

【资料图】

《基因治疗产品长期随访研究技术指导原则》（试行）（药品审评中心，2021年12月）要求，由于基因治疗产品在体内的持续暴露或者需要多次给药等情况，机体可能产生针对基因治疗载体或编码的作用因子的免疫应答。由于基因治疗产品在靶细胞或组织中的表达时间、分布范围或表达强度等差异，机体免疫应答的后果可能从不具有临床意义的一过性的免疫反应 ，到针对靶细胞或组织的免疫攻击，甚至产生严重危及生命的不良事件。

《新型冠状病毒预防用疫苗临床研究技术指导原则》（试行）（药品审评中心，2020年8月）要求，若细胞免疫对于评价疫苗（如病毒载体疫苗、核酸疫苗）的免疫原性具有重要意义，则细胞免疫应作为必需的免疫原性研究内容。对于细胞免疫功能评价，建议检测抗原特异性T细胞反应及相关的细胞因子等。建议考虑的检测指标：特异性T细胞：CD4+、CD8+、Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群；CD3+T细胞、CD20+B细胞和CD16+NK细胞的比例。细胞因子：IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平。

细胞免疫一般使用Elispot技术及ICS（胞内细胞因子染色）技术进行评估。与Elispot技术相比，ICS（胞内细胞因子染色）技术具有诸多优势：

可以同时研究CD4 T cell 及CD8 T cell 中药物特异性细胞因子的水平变化；

可以同时研究Th1型和Th2型药物特异性细胞因子的变化，对于疫苗细胞免疫Th1/Th2的倾向性具有重要意义；

与Elispot技术相比，ICS（胞内细胞因子染色）技术也有较多不足：

灵敏度不如Elispot 技术高；

PBMC细胞冻存的影响较Elispot 技术大。

“昭衍临床检测”昭衍（北京）检测技术有限公司不断优化PBMC细胞的分离，冻存，复苏流程中所用到的商品化试剂及操作要点，在ICS（胞内细胞因子染色）技术平台中，进一步降低了PBMC细胞冻存对于细胞活力及胞内因子表达的影响。目前优化的最新策略，可确保在ICS（胞内细胞因子染色）技术平台中，冻存PBMC与新鲜PBMC具有无差异化的细胞免疫类型和强度。具体见图1-图2.

图1 CEFX肽库刺激下新鲜样品与冻存样品比较（%CD4 T Cells）

图2 CEFX肽库刺激下新鲜样品与冻存样品比较（%CD8 T Cells）

“昭衍临床检测”细胞免疫解决方案

目前昭衍可以开展完整的基因和疫苗临床试验中的细胞免疫研究

基于ELISpot 检测平台的Th1/Th2型细胞因子检测方法的验证和样本分析。

基于优化策略的细胞内细胞因子染色（Intracellular cytokine staining，ICS） 检测平台的Th1/Th2型细胞因子的验证和样本分析。

室温24h运输方案（室温保存24h， CEF和CD3抗体刺激的斑点数在新鲜样品的90%以上）。室温24h运输方案可最大程度解决基因治疗产品和疫苗产品多中心临床试验中，对于临床中心实验条件的苛刻需求。

完整的PBMC采集、分离、冻存、复苏、检测等全流程解决方案，可有效保护PBMC细胞的活力，保证细胞免疫检测结果的可靠性。

[1] 《基因治疗产品长期随访研究技术指导原则》（试行），国家药品监督管理局药品审评中心，2021年12月.

[2] 《新型冠状病毒预防用疫苗临床研究技术指导原则》（试行），国家药品监督管理局药品审评中心，2020年8月.